Антигенные детерминанты белковой природы, как и белки вообще, состоят из аминокислотных остатков, расположенных в пространстве определенным образом. Те остатки, которые приходят в соприкосновение с остатками ком-плементарного антигенсвязывающего центра антитела, называются контакти-рующими. Чтобы взаимодействие имело место, эти остатки, конечно же, должны находиться на поверхности белка, а не быть запрятанными внутрь гидрофобного ядра. Ответственные за специфичность узнавания гипервариабельные участки антител занимают область (30—40 А) х (15 — 20 А) х 10 А (Д. Р. Дэвис, личное сообщение). Это означает, что составляющие антигенную детерминанту контактирующие остатки могут покрывать значительную часть поверхности белка. Аналогичный вывод был сделан на основе оценок размера антигенсвязывающего участка антитела, проведенных с помощью простых синтетических олигопептидов увеличивающейся длины, в частности олиголи-зина. Результаты, полученные в серии тонких экспериментов [86—88], дают основ ...

Многие протеиназы, не имеющие отношения к комплементу, расщепляют С5 с образованием биологически активных пептидов. Описание действия этих протеиназ выходит за рамки настоящей главы (см. обзор [115]). Поэтому здесь мы их лишь перечислим. К протеиназам, расщепляющим нативный С5 на био-логически активные пептиды, относятся трипсин, плазмин, протеиназы поли-морфноядерных лейкоцитов, такие как эластаза и катепсин G, протеиназы макрофагов, тромбоцитов и бактерий. Сейчас уже известно, что фрагменты, образующиеся при расщеплении С5 трипсином, не эквивалентны фрагментам, образующимся при расщеплении С5-конвертазой. Так, например, под действием трипсина не образуется С5а, хотя биологическая активность, сходная с актив-ностью С5а, при этом появляется. Анафилатоксическая и хемотаксическая ак-тивности С5, расщепленного трипсином, принадлежат фрагментам, которые оста-ются соединенными дисульфидными связями с высокомолекулярным полипеп-тидом, сходным с С5Ь.

Между количеством связан ...

Клоны аллореактивных Т-клеток можно получить из популяции рестиму-лированных клеток селезенки или лимфоузлов, но частота отвечающих клеток значительно повышается, если их сначала стимулировать аллоантигеном в СКЛ[49]. Метод предельных разведений представляет собой обычный способ полу-чения цитолитических и нецитолитических клонированных Т-клеток. Если используются нестимулированные Т-клетки, то в лунку микропластины необ-ходимо вносить несколько сотен клеток. При использовании клеток из вторичной СКЛ, полученных через 48 ч культивирования, в микропластины добавляют от 0,1 до 1 клетки в расчете на одну лунку. Клонируемые клетки суспендируют в культуральной среде, содержащей IL-2, обычно Кон А КЖ, и по 100 мкл такой суспензии добавляют в лунки, содержащие по 106 облученных аллогенных клеток селезенки (1400—3300 рад) в 100 мкл среды с 20% СЭК. Дополнительные 50 мкл среды, содержащие 10% СЭК, и 50 мкл IL-2, добавляют в лунки через 4 дня 151].

Кластеры клеток появляются в ...

С давних пор иммунологи, работавшие с опухолями, мечтали выявить у человека антигены, специфичные для опухолей. Использование монокло-нальных антител, обладающих точно известной специфичностью, дало возможность идентифицировать целый ряд антигенов, характерных, по-видимому, для определенных опухолей. Были описаны антитела, реагирующие с меланомными антигенами488], с клетками колоректальной карциномы [89], нейробластомы [90] и с антигенами, общими для различных видов лимфатической лейкемии [91]. Таков немногочисленный перечень моноклон ал ьных антител, выявляющих антигены, экспрессируемые в большей степени или исключительно на по-верхности опухолевых клеток.
Таким образом, использование моноклон ал ьных антител позволяет избе-жать проблем, связанных с применением обычных антител, индуцируемых опу-холевыми клетками, когда в ответ на антиген у животного появляется множество различных антител, реагирующих не только с опухолевыми антигенами, но также и с антигенами, экспрессир ...

В данном методе Ц20], как и в предыдущем, антитела предварительно вводят в гель, однако диффузия антигена идет не в одном, а в двух направлениях (рис. 23.20,i>). Раствор, содержащий антиген а, вносят в небольшую лунку, вырезанную в геле, сформированном в чашке Петри. Таких лунок делается несколько, и в каждую из них антиген добавляют после очередного разбавления. Внесенный антиген начинает диффундировать, вследствие чего вокруг каждой лунки возникает градиент его концентрации. Когда на некотором расстоянии от лунки концентрация антигена достигнет точки эквивалентности, вокруг лунки появится кольцо преципитации соответствующего радиуса. Чем выше была первоначальная концентрация антигена в лунке, тем на большее расстояние он продиффундирует до того, как сформируется кольцо, и тем шире будет это кольцо. Площадь кольца прямо пропорциональна начальной концентрации антигена. Данный метод представляет собой удобный количественный тест, широко используемый при определении класса иммуногл ...

Осуществляемое Т-клетками разрушение ткани не зависит ни от антител, ни от системы комплемента. Так, например, популяции лимфоидных клеток, в которых не удается обнаружить антитела даже самыми чувствительными ме-тодами, часто способны лизировать клетки. Осуществляемый Т-клетками лизис может происходить и в отсутствие сыворотки, причем ни скорость, ни степень лизиса не меняются при добавлении источника комплемента. Более того, на осуществляемый клетками лизис не влияют антитела против компонентов ком-племента С2, СЗ и G5.
Т-клеточный лизис in vitro требует тесного контакта между эффекторной клеткой и ее мишенью. Если киллерные клетки и клетки-мишени разделены полупроницаемой мембраной или суспендированы в вязкой среде, например в агарозе или декстране, лизиса не происходит. Клети-мишени лизируются в ре-зультате однократного взаимодействия с эффекторной клеткой. Это следует из линейного характера зависимости степени лизиса от времени и концентрации эффекторных клеток [5].
< ...

Антигенные детерминанты некоторых биологически важных соединений построены из углеводов. Такие детерминанты часто входят в состав гликоли-пидов (например, антигены клеточных стенок бактерий и главные антигены групп крови) и гликопротеинов («минорные» групповые антигены крови, такие, как резус-фактор Rh). Кроме того, некоторые спонтанно появляющиеся мие-ломные белки, как было показано, обладают специфичностью по отношению к углеводам, что, возможно, отражает широкую распространенность углеводных антигенов в окружающей среде. До появления гибридом такие миелом-ные белки широко использовались для изучения реакции антигена с моно-клональными антителами.
Из экспериментов следует, что основные антигенные детерминанты поли-сахаридов часто представляют собой короткие олигосахариды (длиной 1—5 остатков сахара), находящиеся на невосстановленных концах полимерных цепей [73J. Каждая детерминанта аналогична гаптену, состоящему из нескольких остатков сахара и пришитому к большому полисах а ...

Низкие концентрации ЛТ-В4 стимулируют высвобождение лизосомных ферментов из нейтрофилов человека [132], хотя по данным большинства лабораторий для проявления этого эффекта необходимо одновременное при-сутствие цитохалазинов. 5-ГЭТЕ, правда, в высоких концентрациях вызывает секрецию этих ферментов и без цитохалазинов [397]. Тот факт, что высвобожде-ние ферментов из гранул совпадает во времени с внутриклеточным образованием больших количеств и ЛТ~В4, и 5-ГЭТЕ, свидетельствует, конечно, о возможном прямом участии одного или обоих этих липидов в секреции.

Высокая активность ЛТ-В4 в различных биологических процессах предпо-лагает наличие высокоспециализированных рецепторов этого вещества. Хотя связывание молекул растворимых липидов, подобных ЛТ-В4, не так просто изучать, как связывание полипептидов, тем не менее усилиями двух лабораторий было показано, что нейтрофилы человека содержат специфические рецепторы ЛТ-В4 [398, 3993. Эти исследования проводились при 4СС, поскольку ...

Роль клеток, сходных с Тгзт> в процессе образования гранулем, была недавно установлена. Обычно гранулемы образуются при шистоматозах и дру-гих глистных инфекциях, при некоторых лимфоидных опухолях, а также в ответ на чужеродные агенты, такие, как тальк, и продукты различных бактерий, таких, как БЦЖ или Corynebacterium parvum. Гранулема представляет собой локальный воспалительный очаг, состоящий преимущественно из мононуклеар-ных клеток. Она возникает в ответ на постоянную стимуляцию чужеродным агентом, в том числе живым [34]. Строение гранулем хорошо известно. Между тяжами фиброзной соединительной ткани располагаются главные клеточные компоненты — макрофаги. В зависимости от причин возникновения гранулемы в воспалительном очаге могут присутствовать еще лимфоциты, плазмациты, эозинофилы и нейтрофилы, а также отложения кальция. На рис. 26.3 показана развитая гранулема тонкого кишечника, возникшая в ответ на постоянную сти-муляцию клеток ТГзт> реагирующих на антиген, прикрепленный к поли ...

Для получения соответствующих препаратов IL-2 используются несколько разных методов. Содержание IL-2 в культуральной жидкости можно просто и быстро определить, измеряя включение 3Н-тимидина IL-2-зависимой линией клеток при последовательных разведениях культуральной жидкости [54]. Активность неизвестных образцов сравнивают с активностью стандартного пре-парата. Несколько различных индикаторных клеточных линий, которые можно получить в соответствующих лабораториях, дают сравнимые результаты.
Довольно много IL-2 содержится в культуральной жидкости (КЖ) клеток крысиной селезенки, стимулированных конканавалином А (Кон А КЖ) [31, 32]. В Кон А КЖ обычно представлены и другие лимфокины, включая CSF и BCGF [55]. Такие супернатанты используются для исходного клонирования и для поддержания клонированных Т-клеток. Однако в том случае, когда кло-нированные клетки, полученные в присутствии 1L-2, антигена и филлерных клеток, поддерживают в крысиной Кон А КЖ даже в течение нескольки ...